■ 產(chǎn)品介紹
Y190菌株是Clontech公司開(kāi)發(fā)的GAL4系統酵母雙雜實(shí)驗用菌株，MATa型，可直接轉化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過(guò)mating操作進(jìn)行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為: trp1，leu2，cyh2；報告基因為：lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母雙雜系統需要兩種質(zhì)粒配套使用：(pGB和pACT2)或（pGBKT7和pGADT7）。質(zhì)粒pGB由pGBKT7改造而來(lái)，篩選標志為T(mén)RP1，用于表達DNA-BD(來(lái)自酵母轉錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒pACT2與pGADT7的結構和功能類(lèi)似，篩選標志為L(cháng)EU，用于表達AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系統原理：一個(gè)完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個(gè)結構域：位于N端1~174位氨基酸區段的DNA結合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄，但當二者接近時(shí)，則呈現完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉錄表達。正常條件下，BD不與AD結合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成 bait融合蛋白(bait–BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會(huì )促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉錄。 |
基因型： | MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ |
■ 基本信息
培養基: | YPD/YPDA |
菌株類(lèi)別: | 酵母菌 |
培養條件: | 28℃，有氧，YPD/YPDA |
質(zhì)粒轉化: | 化轉/電轉 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應用: | 酵母雙雜交 |
■ 使用方法
收到菌液及時(shí)四區劃線(xiàn)活化，挑取單克隆在YPD中培養到生長(cháng)對數中后期加入終濃度30%無(wú)菌甘油保種，分裝置于-80℃保存，避免反復化凍。建議超凈臺內劃線(xiàn)涂板，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 酵母菌在YPD培養基上會(huì )變粉，是正?，F象，可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降，不建議直接長(cháng)期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存，反復凍融菌株活力下降。
4. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿 實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
