■ 基本信息
別名: | pColdGST |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸桿菌載體；pCold系列表達質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5097bp |
質(zhì)粒標簽: | N-GST, N-HRV 3C蛋白酶切位點(diǎn),N-His |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養條件: | 37度 |
表達宿主: | 大腸桿菌 |
培養條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測序引物: | pCold Forward:5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3 |
3'測序引物:
| pCold Reverse 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3 |
功能簡(jiǎn)介: | pCold-GST載體表達GST融合蛋白，GST標簽可以提高目的蛋白的可溶性，提高目的蛋白的純度。 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達 |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pCold GST DNA在冷休克載體的基礎上，整合了來(lái)源于Schistosoma japonicum的谷胱甘肽S-轉移酶(glutathione S-transferases, GST)可溶性標簽。通過(guò)GST在目的蛋白質(zhì)N末端的融合表達，可提高融合蛋白質(zhì)的穩定性和可溶性。本制品在cspA啟動(dòng)子的下游插入了5’非編碼區（5’-UTR）、翻譯增強元件（TEE）、His標簽、GST標簽和多克隆位點(diǎn)（MCS）（下圖）。此外，在cspA啟動(dòng)子下游還插入了可以嚴格調控目的基因表達的lac operator。GST標簽融合蛋白質(zhì)可進(jìn)行高親和性純化。在GST標簽和多克隆位點(diǎn)（MCS）之間插入了高特異性HRV 3C Protease 的識別序列，可從融合蛋白質(zhì)中去除標簽。HRV 3C Protease的最適溫度為4～5℃，可以在溫和的條件下進(jìn)行目的蛋白質(zhì)的標簽去除反應。pCold 系列載體的啟動(dòng)子是大腸桿菌來(lái)源的，所以大部分大腸桿菌都可以作為表達宿主使用。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK1596 pCold-GST大腸表達質(zhì)粒.txt
